Նախատեսված է օգտագործման համար
Այն օգտագործվում է մարդու շիճուկի կամ ախտահարման էքսուդատի նմուշներում Monkeypox վիրուսի հայտնաբերման համար՝ օգտագործելով իրական ժամանակի PCR համակարգեր:
Փորձարկման սկզբունք
Այս արտադրանքը լյումինեսցենտային զոնդի վրա հիմնված Taqman® իրական ժամանակի PCR վերլուծության համակարգ է:Հատուկ պրայմերներ և զոնդեր նախատեսված են Monkeypox վիրուսի F3L գենի հայտնաբերման համար:Ներքին հսկողությունը, որն ուղղված է մարդու պահպանված գենին, վերահսկում է նմուշների հավաքումը, նմուշների մշակումը և իրական ժամանակում PCR գործընթացը՝ կեղծ բացասական արդյունքներից խուսափելու համար:Կոմպլեկտը լիովին պրեմիքս լիոֆիլացված համակարգ է, որը ներառում է Կապիկի վիրուսի հայտնաբերման համար անհրաժեշտ նյութեր՝ նուկլեինաթթվի ուժեղացման ֆերմենտ, UDG ֆերմենտ, ռեակցիայի բուֆեր, հատուկ պրայմեր և զոնդ:
Բաղադրիչներ | Փաթեթ | Բաղադրիչ |
Monkeypox վիրուսԼյոֆիլացված պրեմիքս | 8 շերտ PCR խողովակներ× 6 տոպրակ | Պրայմերներ, զոնդեր, dNTP/dUTP Mix, Mg2+, Taq ԴՆԹ պոլիմերազ, UDG ֆերմենտ |
MPV դրական հսկողություն | 400 μL×1 խողովակ | Թիրախային գեն պարունակող ԴՆԹ-ի հաջորդականությունները |
MPV բացասական հսկողություն | 400 μL×1 խողովակ | ԴՆԹ-ի հաջորդականությունները, որոնք պարունակում են մարդու գենի հատված |
Լուծման լուծույթ | 1 մլ × 1 խողովակ | Կայունացուցիչ |
Համապատասխանության վկայական | 1 հատ | / |
1. ՆմուշՀավաքածու:Նմուշը պետք է համապատասխանաբար հավաքվի ստերիլ խողովակների մեջ
ստանդարտ տեխնիկական բնութագրերով:
2. Ռեագենտի պատրաստում (Ռեագենտի պատրաստման տարածք)
Հեռացրեք փաթեթի բաղադրիչները, հավասարակշռեք դրանք սենյակային ջերմաստիճանում՝ սպասման ռեժիմում օգտագործելու համար:
3. Նմուշների մշակում (Նմուշների մշակման տարածք)
3.1 Նուկլեինաթթվի արդյունահանում
Նուկլեինաթթվի արդյունահանման համար խորհուրդ է տրվում վերցնել 200 μL հեղուկ նմուշներ, դրական հսկողություն և բացասական հսկողություն՝ համաձայն վիրուսային ԴՆԹ-ի արդյունահանման փաթեթների համապատասխան պահանջների և ընթացակարգերի:
3.2 Լյոֆիլացված փոշու լուծարում և կաղապարի ավելացում
Պատրաստել Monkeypox Virus Lyophilized premix՝ ըստ նմուշների քանակի:Մեկ նմուշի կարիք ունի մեկ PCR խողովակ, որը պարունակում է լիոֆիլացված պրեմիքս փոշի:Բացասական վերահսկողությունը և դրական վերահսկողությունը պետք է դիտարկվեն որպես երկու նմուշ:
(1) Լյոֆիլացված պրեմիքս պարունակող յուրաքանչյուր PCR խողովակի մեջ ավելացրեք 15 μL լուծարող լուծույթ, այնուհետև յուրաքանչյուր PCR խողովակի մեջ ավելացրեք 5 μL արդյունահանված նմուշներ/ Բացասական հսկողություն/Դրական վերահսկողություն:
(2) Սերտորեն փակեք PCR խողովակները, ձեռքով շփեք PCR խողովակները, մինչև լիոֆիլացված փոշին ամբողջությամբ լուծարվի և խառնվի, հեղուկը հավաքեք PCR խողովակների հատակին ակնթարթային ցածր արագությամբ ցենտրիֆուգման միջոցով:
(3) Եթե հայտնաբերման համար օգտագործեք իրական ժամանակի ընդհանուր PCR գործիք, ապա ուղղակիորեն տեղափոխեք PCR խողովակները ուժեղացման տարածք.Եթե հայտնաբերման համար օգտագործեք BTK-8, ապա պետք է կատարեք հետևյալ գործողությունները. PCR խողովակից 10 մկլ հեղուկ տեղափոխեք BTK-8-ի ռեակցիայի չիպի հորատանցք:Մեկ PCR խողովակը համապատասխանում է չիպի վրա գտնվող մեկ հորին:Պիպետտավորման աշխատանքի ընթացքում համոզվեք, որ խողովակը ուղղահայաց է 90 աստիճան:Աերոզոլային պատնեշի խողովակների ծայրերը պետք է տեղադրվեն ջրհորի կենտրոնում չափավոր ուժով և դադարեցնեն խողովակը հրել, երբ այն հասնի առաջին փոխանցմանը (փուչիկներից խուսափելու համար):Հորերը լցվելուց հետո հանեք ռեակցիայի չիպի թաղանթը, որը ծածկում է բոլոր հորերը, և չիպն այնուհետև տեղափոխվում է ուժեղացման հայտնաբերման տարածք:
4. PCR ուժեղացում (հայտնաբերման տարածք)
4.1 ՊՇՌ խողովակները/ռեակցիայի չիպը դրեք ռեակցիայի բաքի մեջ և դրեք յուրաքանչյուր ռեակցիայի հորերի անվանումները համապատասխան հերթականությամբ:
4.2 Հայտնաբերման ֆլյուորեսցենտության կարգավորումներ. (1) Կապիկների վիրուս (FAM);(2) Ներքին վերահսկողություն (CY5):
4.3 Գործարկել հեծանվավազքի հետևյալ արձանագրությունը
Արձանագրություն ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:
Քայլեր | Ջերմաստիճանը | Ժամանակը | Ցիկլեր | |
1 | Նախադենատուրացիա | 95℃ | 2 րոպե | 1 |
2 | Դենատուրացիա | 95℃ | 10 վ | 45 |
Եռացում, ընդլայնում, ֆլուորեսցենտային ստացում | 60℃ | 30 վ |
BTK-8 արձանագրություն.
Քայլեր | Ջերմաստիճանը | Ժամանակը | Ցիկլեր | |
1 | Նախադենատուրացիա | 95℃ | 2 րոպե | 1 |
2 | Դենատուրացիա | 95℃ | 5 վ | 45 |
Եռացում, ընդլայնում, ֆլուորեսցենտային ստացում | 60℃ | 14 վ |
5. Արդյունքների վերլուծություն (խնդրում ենք ծանոթանալ գործիքի օգտագործողի ձեռնարկին)
Արձագանքից հետո արդյունքները ինքնաբերաբար կպահվեն:Սեղմեք «Վերլուծել»՝ վերլուծելու համար, և գործիքը ավտոմատ կերպով կմեկնաբանի յուրաքանչյուր նմուշի Ct արժեքները արդյունքի սյունակում:Բացասական և դրական վերահսկողության արդյունքները պետք է համապատասխանեն հետևյալ «6. Որակի հսկողություն».
6. Որակի հսկողություն
6.1 Բացասական հսկողություն. FAM ալիքում Ct կամ Ct>40 չկա, CY5 ալիքում Ct≤40 նորմալ ուժեղացման կորով:
6.2 Դրական հսկողություն. Ct≤35 FAM ալիքում՝ նորմալ ուժեղացման կորով, Ct≤40 CY5 ալիքում՝ նորմալ ուժեղացման կորով:
6.3 Արդյունքը վավեր է, եթե վերը նշված բոլոր չափանիշները բավարարված են:Հակառակ դեպքում արդյունքն անվավեր է:
Արդյունքների մեկնաբանություն
Հետևյալ արդյունքները հնարավոր են.
FAM ալիքի Ct արժեքը | CY5 ալիքի Ct արժեքը | Մեկնաբանություն | |
1# | Ոչ Ct կամ Ct>40 | ≤40 | Monkeypox վիրուսը բացասական է |
2# | ≤40 | Ցանկացած արդյունք | Monkeypox վիրուսը դրական է |
3# | 40-45 | ≤40 | Կրկին թեստավորում;եթե այն դեռ 40~45 է, ապա զեկուցեք որպես 1# |
4# | Ոչ Ct կամ Ct>40 | Ոչ Ct կամ Ct>40 | Անվավեր |
ՆՇՈՒՄԵթե սխալ արդյունք է ստացվում, նմուշը պետք է հավաքվի և նորից փորձարկվի:
ապրանքային անուն | Կատու.Ոչ | Չափը | Նմուշ | Պահպանման ժամկետը | Տրանս.& Ստո.Ջերմաստիճանը |
Monkeypox Virus Real Time PCR հավաքածու | B001P-01 | 48 թեստ / հավաքածու | Շիճուկ/ Վնասվածքի էքսուդատ | 12 ամիս | -25-15℃ |